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还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠的质量控制与检测方法

发表时间:2025-02-13

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠(NADH-Na?)的质量控制与检测方法涉及多个方面,以下是具体介绍:

一、外观与性状检查

目视观察:在自然光或日光灯下,将样品置于白色背景下,用肉眼直接观察。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠通常为白色或类白色粉末,若出现颜色异常(如发黄、发灰等)、有明显杂质或结块现象,可能表明质量存在问题。

二、鉴别试验

紫外分光光度法:利用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠在特定波长下有特征吸收的性质。一般来说,它在260nm340nm左右有吸收峰,通过测定样品在这两个波长处的吸光度,并计算吸光度比值,与标准品数据进行对比,若比值在规定范围内,可初步判定为NADH - Na?。

红外分光光度法:还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠具有特定的红外吸收光谱。将样品制成合适的样品片,用红外光谱仪进行测定,得到的红外光谱图应与标准红外光谱图一致,主要特征吸收峰的位置和强度应相符,以此来鉴别样品是否为NADH - Na?。

三、纯度检测

1. 高效液相色谱法(HPLC

原理:基于不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异,实现对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠及其杂质的分离和定量分析。

操作:选择合适的色谱柱,以磷酸盐缓冲液等为流动相,将样品注入高效液相色谱仪中,在特定的波长下检测。根据保留时间确定NADH - Na?的峰,通过峰面积计算其纯度,一般要求纯度不低于98%或其他规定标准。

2. 薄层色谱法(TLC

原理:利用样品中各组分在薄层板上的吸附、分配等作用的不同,在展开剂的作用下实现分离。

操作:将样品溶液点在硅胶板等薄层板上,用合适的展开剂展开,然后通过显色剂显色或在紫外灯下观察斑点。若样品只出现一个与标准品位置相同的斑点,且无其他明显杂质斑点,表明纯度较高。可通过与标准品斑点的对比,大致判断纯度情况。

四、水分含量测定

1. 卡尔·费休法

原理:基于碘与水发生氧化还原反应,通过消耗的碘的量来计算水分含量。

操作:在卡尔·费休滴定仪中,将样品加入到含有卡尔·费休试剂的滴定池中,进行滴定,仪器自动根据消耗的试剂体积计算出样品中的水分含量,一般要求还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠的水分含量在一定范围内,如不超过5%

2. 干燥失重法

原理:在规定的温度和时间条件下,将样品干燥至恒重,通过样品减少的重量计算水分及挥发性物质的含量。

操作:准确称取一定量的样品,置于已恒重的称量瓶中,在烘箱中于105℃等规定温度下干燥至恒重,计算干燥前后样品的重量差,从而得出水分含量。

五、有关物质检查

杂质对照品法:对于已知杂质,可采用杂质对照品法。配制一系列不同浓度的杂质对照品溶液和供试品溶液,分别注入高效液相色谱仪等检测仪器中。根据杂质对照品的峰面积与浓度的关系,绘制标准曲线,然后通过供试品溶液中杂质峰的面积,在标准曲线上查得杂质的含量。

自身对照法:当没有杂质对照品时,可采用自身对照法。将供试品溶液稀释一定倍数后作为对照溶液,分别进样分析。以对照溶液中主成分的峰面积为参照,通过比较供试品溶液中杂质峰与对照溶液主成分峰的面积大小,来控制杂质的含量。

六、含量测定

氧化还原滴定法:利用NADH - Na?的还原性,可采用碘量法等氧化还原滴定方法,它在酸性条件下与过量的碘发生氧化还原反应,过量的碘用硫代硫酸钠标准溶液滴定,根据消耗的硫代硫酸钠的量来计算NADH - Na?的含量。

分光光度法:基于还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷二钠在340nm处的吸光系数,准确称取一定量的样品,溶解并定容至一定体积,在340nm波长下测定吸光度,根据朗伯 - 比尔定律计算样品中NADH - Na?的含量。

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